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　　NK细胞活性测定（MTT比色法） NK细胞 NK细胞属于固有免疫细胞。 NK杀伤靶细胞时既不需要特异性抗体参与，也不需要抗原预先致敏的淋巴细胞。在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用。 MTT法检测NK细胞活性 原理： 将NK细胞和靶细胞共同培养，NK细胞可杀伤靶细胞，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶使外源性黄色的MTT还原成蓝紫色的Formazan结晶，并沉积在细胞里。而死细胞无此功能，通过比色检测可以检测培养物中活细胞的数量，从而计算NK细胞杀伤靶细胞的能力。 NK活性检测 效应细胞：NK细胞（小鼠脾脏细胞） 靶细胞：Yac-1细胞（实验员准备） NK细胞制备：小鼠脾细胞分离 脱臼法处死小鼠，酒精棉球消毒皮肤，取脾，放入滤网，置于平皿中，在滤网脾脏处加入3ml Hanks液; 用试管底部碾磨脾脏，制成脾细胞悬液，200目滤网制成单细胞悬液; 离心（1500转/分 5min），弃去上清; 加入Hanks液3ml ，重悬细胞， 1500转/分 5min，去上清，加入1ml 1640培养液，混匀细胞； 细胞计数：取细胞悬液20微升，加到含有780微升白细胞稀释液的Eppendorf管中，混匀，取适量细胞悬液（约15ul），加入计数板中。在显微镜下计数，计算细胞数量。 根据细胞数量，用1640完全培养基配成2×106/ml浓度的细胞悬液。 2、靶细胞的制备（实验员准备）： 取对数生长期YAC-1细胞， Hanks液洗涤2次，计数，调整至2×105/ml。 实验组 靶细胞对照组 效应细胞对照组 靶细胞(YAC-1) 100μl 100μl － 效应细胞 (小鼠脾细胞） 100μl － 100μl 1640培养基 － 100μl 100μl 3、细胞毒试验（96培养板）：每组做3个复孔 4、孵育 二氧化碳培养箱孵育2小时； 加10μl MTT，继续孵育2小时。 5、测OD值 吸取上清约150ul，加150μl 二甲亚砜，振荡10min，测OD值。 （1- 实验组OD值 - 效应细胞对照组OD值 靶细胞对照组OD值 ）×100% NK细胞活性（%）= 6、结果分析 D B C A A B C D 细胞计数计算公式 一大格细胞数?104?40（稀释倍数） 举例：100?104?40=4 ? 107/ml 稀释：取0.1ml细胞原液，加入1.9ml培养液，即为2 ?106/ml；或在原液中加入1ml培养液，混匀，取0.1ml细胞，加入0.9ml培养液，即为2 ?106/ml 10*10 * 10*10 * 10*10 * 10*10 *